Abstrakt

Wewnątrzkomórkowe kaskady sygnalizacyjne, w których pośredniczą MAPK (mitogen activated protein kinases) odpowiedzialne są za biologiczną odpowiedź komórki na bodziec zewnętrzny. Kinazy MAP, do których zaliczmy ERK1/2 (extracellular signaling-regulated kinase), JNK (c-Jun N-terminal kinase) i p38 MAPK regulują aktywność wielu białek, enzymów i czynników transkrypcyjnych i tym samym mają szeroki zakres biologicznego działania. Wiele badań z dziedziny nauk podstawowych dokładnie zdefiniowało wiele szczegółów dotyczących organizacji ich dróg sygnalizacyjnych i aktywacji. Mamy również coraz więcej badań sugerujących, że poszczególne kinazy MAP mogą odgrywać istotną rolę w patogenezie miażdżycy. Mogą one pośredniczyć w indukcji procesu zapalnego, aktywacji komórek śródbłonka, rekrutacji i aktywacji monocytów/makrofagów, proliferacji komórek mięśni gładkich i różnicowaniu limfocytów T, czyli głównych mechanizmach patogenetycznych miażdżycy. Specyficzna inhibicja aktywności poszczególnych kinaz MAP może się okazać w przyszłości nowym terapeutycznym podejściem do zahamowania formowania zmian miażdżycowych. W pracy omówiono aktualny stan wiedzy na temat zależnych od kinaz MAP komórkowych i molekularnych mechanizmów leżących u podstaw miażdżycy.

Wprowadzenie

Każda komórka, w tym komórki zaangażowane w powstawanie i progresję miażdżycy, musi mieć zdolność odbierania i odpowiedzi na sygnały napływające ze środowiska zewnętrznego. Zachowanie się komórek regulowane jest przez zewnątrzkomórkowe ligandy, które łącząc się z receptorami aktywują kaskadę wewnątrzkomórkowej transdukcji sygnału. Poszczególne drogi sygnałowe kontrolują istotne dla komórek procesy i tym samym odpowiedzialne są za biologiczną odpowiedź komórki na bodziec zewnętrzny.

Kinazy aktywowane mitogenami (MAPK – mitogen activated protein kinases) są zakonserwowaną rodziną enzymów, które propagują sygnał zewnętrzny poprzez kaskadę fosforylacji w celu generowania skoordynowanej odpowiedzi komórki na środowisko [52]. MAPK są kinazami białkowymi o aktywności serynowo-treoninowej, które regulują wiele wewnątrzkomórkowych procesów, włączając w to transkrypcję genów, biosyntezę białek, podziały komórkowe, różnicowanie i przeżycie lub apoptozę komórki. Wyróżniamy trzy podstawowe kinazy MAP: ERK1/2 (extracellular signaling kinases), JNK 1-3 (c-Jun N-terminal kinases) oraz p 38 MAPK. Kinazy MAP aktywowane są poprzez podwójną fosforylację treoniny i tyrozyny w motywie Thr-X- Tyr znajdującym się w pętli aktywacyjnej, gdzie X to Glu, Pro i Gly w ERK, JNK i p38 MAPK, odpowiednio. Konsekwencją aktywacji MAPK jest zapalenie, apoptoza, różnicowanie i proliferacja. Zaangażowanie dróg sygnałowych zależnych od MAPK w patofizjologii chorób naczyniowo-sercowych jest przedmiotem wielu badań naukowych. W artykule podsumowano wiadomości na temat kinaz MAP i ich roli w patogenezie miażdżycy.

Aktywacja kinaz map i ich krótka charakterystyka

Aktywacja kinaz MAP

Kinazy MAP uczestniczą w szlakach sygnalizacyjnych, które są w postaci trójpoziomowej kaskady kinaz, tj. enzymów kolejno aktywowanych w wyniku fosforylacji [52]. Na początku kinaza kinazy aktywującej MAPK (MAPKKK lub MAP3K czy MKKK) powoduje aktywację kinazy aktywującej MAPK (MAPKK lub MAP2K czy MKK), a ta fosforyluje efektorowe kinazy MAP (MAPK). Bodziec→ MAPKKK → MAPKK → MAPK → odpowiedź.

Ryc. 1. Kaskada przekazywania sygnału z udziałem kinaz MAP. Kinazy MAP uczestniczą w szlakach sygnalizacyjnych w postaci trójpoziomowej kaskady: bodziec→ MKKK/MAP3K→ MKK/MAP2K→MAPK→odpowiedź. MKKK mogą być aktywowane przez czynniki wzrostu, miogeny, cytokiny zapalne, TLR czy czynniki stresujące. Do MKKK zaliczmy między innymi: Raf, ASK1, TAK1, MEKK 1-4, czy MLK 1-3. Najbardziej poznanymi MKK są: MEK1/2, MKK3, MKK4, MKK6 i MKK7. Substratami dla aktywnych MAPK, czyli ERK1/2. JNK1/2 i p38 MAPK, są liczne białka, enzymy, inne kinazy białkowe i czynniki transkrypcyjne. Efektem tej kaskady jest: proliferacja, różnicowanie, zapalenie i apoptoza

Pierwszą poznaną MKKK była Raf-1, która łączy się z  zaktywowanym Ras, co skutkuje potranslacyjnymi modyfikacjami prowadzącymi do pełnej aktywacji Raf- 1 [42]. Zaktywowana Raf-1 aktywuje MKK1 lub MKK2 (znane także jako MEK1/2-ERK activator kinase), które aktywują kinazy efektorowe ERK1/2. Oprócz szlaku Ras→Raf→MEK1/2→ERK1/2 jeszcze przynajmniej dwa inne odgrywają istotną rolę w regulacji fizjologii komórki [52]. Są to szlaki prowadzące do powstania kinaz efektorowych: JNK i p 38 MAPK. Zaktywowane Ras promuje aktywację JNK i p 38 MAPK w sposób pośredni poprzez aktywację PI3K (phosphatidyl inositol 3 kinase), która nasila aktywację Rac. Zaktywowany Rac łączy się z MEKK 1-4 (MEK kinase) – członkiem rodziny MKKK dla JNK i p38 MAPK. Innym białkiem wiążącym GTP, które może aktywować MKKK jest Cd42. Kinazami kinaz aktywujących JNK i p38 MAPK mogą być wspomniane MEKKK 1/-4, TAK 1 (transforming growth factor-activated kinase 1) czy ASK 1 (apoptosis signal regulating kinase). Głównymi MKK dla JNK są MKK4 i MKK7. Te dwie kinazy różnią się funkcjonalnie: MKK7 jest głównie aktywowana przez cytokiny, natomiast MKK4 przez stres. Niemniej, do peł- nej aktywacji JNK wymagane są obie kinazy. Głównymi MKK dla p38MAPK są kinazy MKK3 i MKK6. Trójpoziomowa kaskada aktywacji kinaz MAP przedstawiona jest na ryc. 1.

W warunkach fizjologicznych aktywacja kinaz MAP jest często krótkotrwała i ograniczona do okresu stymulacji. Defosforylacja kinaz jest głównym mechanizmem odpowiedzialnym za zmniejszenie aktywności MAPK i jest najbardziej efektywnym sposobem negatywnej regulacji [29]. Proces defosforylacji może zachodzić dzięki działaniu fosfataz białkowych, takich jak fosfatazy białek seryna/ treonina lub dzięki podwójnie swoistym fosfatazom białek, które są szczególnie odpowiedzialne za defosforylację i tym samym deaktywację kinaz MAP, które określa się jako fosfatazy MAPK (MKPs – MAP kinases phosphatase). Czynniki, które aktywują szlaki MAPK, często aktywują MKP, co sugeruje istnienie ścisłej i swoistej kontroli aktywacji i funkcjonowania MAPK przez MKP. Jak dotychczas poznano 11 członków rodziny MKP

Oprócz omówionych wcześniej dróg aktywacji JNK i p 38 MAPK, w niektórych sytuacjach istotnym stymulatorem, który aktywuje drogi sygnalizacyjne niezależnie od Ras, jest stres komórki spowodowany wewnątrzkomórkowym nagromadzeniem reaktywnych form tlenu (RFT), hiperosmolarnością czy dysfunkcją retikulum endoplazmatycznego. Wiele czynników działających stymulująco na komórkę indukuje zwiększone wytwarzanie RFT z jednoczesną aktywacją dróg sygnalizacyjnych prowadzących do aktywacji MAPK [65]. RFT mogą aktywować MAPK poprzez oksydacyjną modyfikację białek sygnalnych, co zmienia ich strukturę i funkcje. Innym mechanizmem może być inaktywacja i degradacja MKP, które utrzymują te drogi w stanie nieaktywnym.

ERK

ERK była pierwszą zidentyfikowaną kinazą z rodziny MAPK [12,56]. Występuje w postaci dwóch izoform: ERK1 (p44) i ERK2 (p42), powszechnie określane jako ERK1/2. Jak wspomniano aktywowana jest w drodze: Raf:MEK:ERK. Kaskada ta jest uruchomiana przez wiele mitogenów, włączając PDGF, tromboksan, insulinę, endotoksyny czy stres. ERK1/2 odpowiedzialna jest za fosforylację czynników transkrypcyjnych c-fos, c-myc czy Elk-1 oraz kinaz białkowych MNK (MAPK signal interacting kinase), MSK (mitogen and stress-activated protein kinase) i RSK (ribosomal S6 kinase). Funkcjonalną konsekwencją aktywacji kaskady kinazy ERK1/2 przez czynniki wzrostowe jest regulacja cyklu komórkowego, proliferacji, różnicowania i transformacji.

JNK

JNK znana jest również jako SAPK (stress activated protein kinase) [12,56]. W skład tej rodziny wchodzą trzy izoformy: powszechnie obecne JNK 1 i JNK 2 oraz występująca tylko w mózgu i sercu – JNK 3. Kaskada kinaz JNK aktywowana jest przez zewnętrznie działające czynniki stresogenne, takie jak naświetlanie UV, hiperosmolarność czy szok termiczny. Ponadto JNK mogą być aktywowane przez LPS (lipopolisacharyd), TNF-α (tumor necrosis factor), IL-1, czy też połączenie z TLR (Tool-like receptor). Jak wspomniano wcześniej JNK są aktywowane przez MKK4 i MKK7, które z kolei są aktywowane przez MKKK, takie jak ASK1, MEKK1-4, TAK1 lub MLK1-3 (mixed lineage kinase1-3). Aktywna postać JNK fosforyluje serynę w pozycji 63 i 73 w transaktywacyjnej domenie c- -Jun, co pozwala na dimeryzację z c-Fos i powstanie AP-1 (activator protein-1), czynnik transkrypcyjny regulujący ekspresję wielu genów przez przyłączenie się do ich miejsc promotorowych. Ponadto JNK reguluje aktywność innych czynników transkrypcyjnych, takich jak: ATF2 (activating transcription factor 2), Elk-1, p53 i c-Myc. Droga sygnalizacyjna JNK reguluje mechanizmy zapalne, proliferację, apoptozę, angiogenezę i migrację.

P 38 MAPK

Wyróżnia się cztery izoformy p38 MAPK, które są kodowane przez cztery różne geny [12,80]. Są to: p38 MAPKα, p38 MAPKβ, p38 MAPKδ, p38 MAPKγ. Ekspresja tych izoform jest różna w różnych tkankach. p38 MAPKα występuje głównie w leukocytach, a p38 MAPKβ w sercu i mózgu. Czynnikami oddziałującymi na wiele komórek za pośrednictwem p38 MAPK, są tzw. czynniki stresujące komórki, czyli stresory, do których zaliczamy przede wszystkim promieniowanie ultrafioletowe, szok osmotyczny czy zwiększoną temperaturę. Do aktywacji p38 MAPK dochodzi również w następstwie działania cytokin zapalnych i czynników wzrostu. Głównymi aktywatorami p38 MAPK są MKK3 i MKK6, które z kolei są aktywowane przez MKKK, takie jak: ASK1, TAK1 i MEKK 1-4. Aktywacja tych MAPKKK prowadzi do aktywacji zarówno p38 MAPK jak i JNK, co prawdopodobnie powoduje, że te dwa szlaki są aktywowane jednocześnie. Inny szlak prowadzący do aktywacji p38 MAPK zależy od małych białek wiążących GTP z rodziny Rho, takich jak Rac 1 i Cd42. Rac 1 aktywuje MEKK a Cd42 MLK, które są MAPKKK dla szlaku p38 MAPK. Substratami dla zaktywowanego p38 MAPK są inne kinazy lub czynniki transkrypcyjne. Pierwszym zidentyfikowanym substratem były MAPKAPK 2 i 3 (MAP kinase activated protein kinase), zwane również MK2 i MK3. Innymi kinazami są MNK i MSK. Wiele czynników transkrypcyjnych może ulegać fosforylacji i tym samym aktywacji pod wpływem p38 MAPK, włączając w to ATF2, MEF2C (monocyte enhancer factor 2 C), Elk-1, p53, NF-κB (nuclear factor κB) i inne. Funkcjonalną konsekwencją aktywacji p38 MAPK jest regulacja odpowiedzi zapalnej, cyklu komórkowego, apoptozy i różnicowania.

Rola kinaz map w patogenezie miażdżycy

Miażdżyca, która jest główną przyczyną chorób naczyniowo-sercowych, jest chorobą o wieloczynnikowej etiopatogenezie, która jest swoistą postacią przewlekłego zapalenia [33,36,55]. W powstawanie i rozwój miażdżycy zaangażowanych jest wiele komórek, włączając komórki śródbłonka, monocyty/makrofagi, komórki mięśni gładkich oraz limfocyty T. Przebieg miażdżycy modyfikowany jest zaburzeniami w metabolizmie lipidów, stresem oksydacyjnym i toczącym się w ścianie naczynia procesem fibroproliferacyjnym. Na przebieg miażdżycy mają wpływ jej czynniki ryzyka, takie jak zaburzenia w metabolizmie lipidów, nadciśnienie, cukrzyca, palenie papierosów i czynniki genetyczne. Miażdżyca jest powoli narastają- cą w czasie chorobą, która rozpoczyna się już w dzieciństwie, kiedy to nie ujawnia się klinicznie. W odpowiedzi na wiele czynników działających destrukcyjnie na ścianę naczynia dochodzi do dysfunkcji komórek śródbłonka, co umożliwia akumulację w błonie wewnętrznej mononuklearnych leukocytów i LDL, które podlegają różnego rodzaju modyfikacjom stając się cząsteczkami o silnych właściwościach proaterogennych. Znajdujące się w błonie wewnętrznej monocyty zostają przekształcone w makrofagi, które w sposób niekontrolowany wyłapują zmodyfikowane LDL, co prowadzi do powstania komórek piankowatych. Powstaje pierwszy widoczny etap miażdżycy tzw. plamka żółta, która w początkowym okresie składa się z makrofagów, limfocytów T i komórek piankowatych. W późniejszym okresie pod wpływem wydzielanych lokalnie czynników wzrostu dochodzi do proliferacji i migracji komórek mięśni gładkich w obręb błony wewnętrznej, gdzie zmieniają swój fenotyp z kurczliwego na syntetyzujący, co prowadzi do zwiększonej syntezy tkanki łącznej i wytworzenia czapeczki pokrywającej zmianę miażdżycową. Dochodzi do powstania tzw. zmiany zaawansowanej lub inaczej blaszki włóknisto-tłuszczowej. Zmiana ta charakteryzuje się obecnością bogatego w lipidy rdzenia nekrotycznego powstającego w następstwie apoptozy komórek piankowatych oraz zaktywowanych makrofagów i limfocytów. Obecne w błonie wewnętrznej makrofagi i limfocyty T są źródłem wielu cytokin, które w głównej mierze odpowiadają za wiele przebiegających w tym obszarze reakcji immunologiczno-zapalnych. Toczące się w ścianie naczynia zapalenie, jak i apoptoza, zwłaszcza komórek śródbłonka i mięśni gładkich, może być przyczyną pęknięcia płytki miażdżycowej i tworzenia w tym miejscu zakrzepu zamykającego światło naczynia, co jest główną przyczyną wystąpienia ostrych powikłań klinicznych miażdżycy. W dalszej części opracowania omówione zostaną poszczególne mechanizmy powstawania blaszki miażdżycowej z uwzględnieniem roli kinaz MAP.

Ryc. 2. Schemat patomechanizmów zaangażowanych w powstawanie miażdżycy. Strzałki w opisie pod ryciną obrazują wpływ kinaz MAP. ICAM-1 – cząsteczka adhezji międzykomórkowej -1, MCP-1 – czynnik chemotaktyczny dla monocytów, NO – tlenek azotu, oxyLDL – zmodyfikowane oksydacyjnie LDL, PDGF – czynnik wzrostowy pochodzenia płytkowego, VCAM-1 – cząsteczka adhezji komórkowej naczyń

Znaczenie komórek śródbłonka w patogenezie miażdżycy i rola kinaz MAP

Głównym i najwcześniejszym wydarzeniem dla powstawania i rozwoju miażdżycy jest dysfunkcja śródbłonka, którą określa się jako wiele zmian, które pozwalają tym komórkom na pełnienie nowych funkcji [16,46]. Tak zmieniony śródbłonek nie zapewnia prawidłowego rozszerzania naczyń, zwiększa przepuszczalność dla makrocząsteczek, promuje zapalenie i proliferację mięśni gładkich, przyczynia się do nasilenia stresu oksydacyjnego oraz wykazuje cechy prozakrzepowe.

Najbardziej poznaną i najczęściej badaną cechą dysfunkcji śródbłonka jest upośledzenie funkcji wazodylatacyjnych ściany naczynia, co wiąże się z upośledzeniem wytwarzania lub biodostępnością tlenku azotu (NO) i prostacykliny. NO wytwarzany jest przez śródbłonkową syntezę NO (eNOS), której głównym aktywatorem są siły ścinania. Z dotychczasowych badań wynika, że niektóre obszary naczyń tętniczych są szczególnie predysponowane do powstawania zmian miażdżycowych. Są to obszary z małymi siłami ścinania i zaburzonym przepływem krwi [9,46]. Niewielkie siły ścinania aktywują geny i białka zaangażowane w promowanie miażdżycy, w tym odpowiedzialne za syntezę NO. Upośledzenie biodostępności NO w aspekcie patogenezy miażdżycy jest o tyle ważne, że oprócz działania wazodylatacyjnego i antyagregacyjnego odgrywa on istotną rolę przeciwzapalną i przeciwmiażdżycową.

Wydaje się, że kinaza p38 MAPK może pośredniczyć w upośledzaniu zależnej od NO wazodylatacyjnej funkcji śródbłonka. Wykazano, że CRP hamuje tę funkcję śródbłonka przez aktywację p38 MAPK [50]. Natomiast podawanie inhibitora tej kinazy szczurom z nadciśnieniem prowadziło do przywrócenia zależnej od NO relaksacji ściany naczynia [26]. Dysfunkcja śródbłonka prowadząca do upośledzenia zdolności naczyń do rozkurczu związana jest ponadto z wydzielaniem substancji naczynioskurczowych, takich jak endotelina 1 (ET-1) i angiotensyny II (Ang II) [16,46]. Wykazano, że oxyLDL stymulują fosforylację ERK z towarzyszącą aktywacją AP-1 i zwiększoną ekspresją i sekrecją ET-1 [76]. Natomiast w indukowanej TNF-α ekspresji ET-1 zarówno na poziomie białka, jak i mRNA pośredniczą JNK i p 38 MAPK [77].

Cechą dysfunkcji komórek śródbłonka istotną zarówno dla patogenezy miażdżycy, jak i mechanizmów odpowiedzi zapalnej jest zwiększona ich przepuszczalność. Cecha ta umożliwia przechodzenie LDL z krwi do błony wewnętrznej ściany naczynia, gdzie łączą się z proteoglikanami, co uniemożliwia im przenikanie w głębsze warstwy ściany naczynia i pozwala na ich modyfikację [34]. Najbardziej istotna jest modyfikacja oksydacyjna, ponieważ prowadzi do powstawania oxyLD, cząsteczek o silnych właściwościach proaterogennych. Wykazano, że szlaki sygnalizacyjne zależne od ERK1/2 i p38 MAP pośredniczą w indukowanej VEGF zwiększonej przepuszczalności komórek śródbłonka [70].

Cechą dysfunkcji śródbłonka, która promuje zapalenie jest zmiany fenotypu antyadhezyjnego na proadhezywny [33]. Zdrowy śródbłonek o fenotypie antyadhezyjnym nie pozwala na adhezję i transendotelialną wędrówkę leukocytów, gdyż nie ujawnia na swojej powierzchni większości cząsteczek adhezyjnych niezbędnych do zaistnienia tego procesu. Fenotyp proadhezywny związany jest z pojawieniem się ekspresji cząsteczek adhezyjnych na powierzchni śródbłonka, pośredniczących w interakcjach między komórkami ściany naczynia a komórkami krwi. Do śródbłonkowych cząsteczek adhezyjnych zaliczamy: selektynę E i P, ICAM-1 (intercellular adhesion molecule-1), ICAM- 2, VCAM-1 (vascular cell adhesion molecule) i PECAM-1 (platelet endothelial cell adhesion molecule-1). Głównym czynnikiem transkrypcyjnym regulującym ekspresję śródbłonkowych cząsteczek adhezyjnych jest NF-κB. Selektyny pośredniczą w toczeniu się leukocytów po komórkach śródbłonka, co umożliwia interakcje między ICAM-1 a LFA-1 i VCAM-1 a VLA-4. LFA-1 jest integryną obecną na wszystkich leukocytach, natomiast VLA-4 tylko na monocytach i limfocytach. Interakcje między śródbłonkowymi cząsteczkami adhezyjnymi a integrynami na leukocytach są niezbędne do adhezji i transendotelialnej migracji leukocytów. Najbardziej znane są: VCAM-1 i ICAM-1 i jak wynika z wielu badań in vitro i in vivo odgrywają one istotną rolę w patogenezie miażdżycy [19]. Proces adhezji z następową transendotelialną wędrówką monocytów i limfocytów zależy nie tylko od ekspresji śródbłonkowych cząsteczek adhezyjnych, ale także od wydzielanych lokalnie czynników chemotaktycznych. Pod wpływem tych czynników dochodzi do zmian konformacyjnych obecnych na leukocytach integryn, które pozwalają na ich trwałe połączenie z ICAM- 1 lub VCAM-1. Dopiero trwałe połączenie pozwala na transendotelialną wędrówkę leukocytów. Jednym z najbardziej poznanych w aspekcie patogenezy miażdżycy czynnikiem chemotaktycznym jest MCP-1 (monocyte chemotactic protein) [33,49]. Białko to jest wytwarzane przez zaktywowane makrofagi, komórki śródbłonka i mięśni gładkich.

Z wielu dotychczasowych badań wynika, że kinazy MAP pośredniczą we wszystkich mechanizmach zaangażowanych w proces rekrutacji mononuklearnych leukocytów. Inkubacja komórek śródbłonka z TNF-α prowadzi do aktywacji ERK, JNK i p38 MAPK z jednoczesną degradacją IκB i następową translokacją NF-κB do jądra, a w konsekwencji stymulacją ekspresji ICAM-1 [8]. Indukowany TNF-α wzrost ekspresji ICAM-1 został zahamowany przez SP600125 (inhibitor JNK) i SB203580 (inhibitor p38 MAPK), ale nie przez PD98059 (inhibitor ERK), co sugeruje że JNK i p38 MAPK są zaangażowane w transdukcję sygnału prowadzącą do stymulowanej TNF-α zwiększonej ekspresji ICAM-1. W innych badaniach wykazano, że te same inhibitory hamują stymulowaną TNF-α ekspresję ICAM-1 i VCAM-1 [37]. Autorzy sugerują, że JNK i p38 MAPK pośredniczą w indukcji ekspresji tych cząsteczek poprzez wpływ na AP-1 i NF-κB. Ang II stymuluje ekspresję VCAM-1 wykorzystując drogi sygnałowe zależne od ERK1/2 i p38 MAPK, a ekspresję ICAM-1 tylko od p38 MAPK [6]. W innych badaniach wykazano, że Ang II stymuluje ekspresję VCAM-1 wykorzystując p38 MAPK do aktywacji NF-κB [11]. Również nikotyna nasila ekspresję ICAM-1 i VCAM-1 przez aktywację p 38 MAPK, NF-κB i AP-1 [68].

p38 MAPK odgrywa główną rolę w regulacji syntezy MCP- 1, ponieważ zahamowanie działania tej kinazy zapobiega sekrecji tego białka [14]. Opublikowane ostatnio badania wskazują na istotną rolę fosfatazy MAPK w regulacji rekrutacji monocytów. Wykazano, że monocyty poddane długotrwałemu działaniu glukozy mają obniżony poziom MKP-1 z towarzyszącą hiperaktywacją ERK1/2 i p38 MAPK i jednoczesnym wzrostem ilości MCP-1 oraz podwyższoną zdolnością do adhezji i chemotaksji [28]. W badaniach przeprowadzonych u myszy pozbawionych MKP-1, a jednocześnie podatnych na dysfunkcję związaną z zaburzeniami metabolicznymi wykazano zwiększoną chemotaksję in vivo i przyspieszone formowanie zmiany miażdżycowej. Jak wiadomo apoptoza komórek śródbłonka jest zjawiskiem niekorzystnym i może być odpowiedzialna za transformację zmiany stabilnej w zmianę predysponowaną do pęknięcia [79]. Badania Nakagami i wsp. [48] wykazały, że p38 MAPK jest zaangażowana w indukowaną glukozą apoptozę komórek śródbłonka poprzez wpływ na białko bax i kaspazę 3. Również homocysteina indukuje apoptozę komórek śródbłonka z udziałem p38 MAPK [3]. Autorzy sugerują, że za aktywację p38 MAPK odpowiedzialne jest zwiększone pod wpływem homocysteiny wewnątrzkomórkowe wytwarzanie RFT.

Progenitorowe komórki śródbłonka (endothelial progenitor cells – EPC) odgrywają istotną rolę w angiogenezie i naprawianiu uszkodzonego naczynia, a pacjenci z chorobami naczyniowo-sercowymi mają zredukowaną liczbę EPC [22,64]. EPC od pacjentów z tymi chorobami mają istotnie wyższe poziomy fosforylacji p38 MAPK niż EPC od zdrowych osób [64]. Zastosowanie SB 203580 zwiększa liczbę EPC. Z badań in vitro wynika, że p38 MAPK jest zaangażowana w apoptozę indukowaną homocysteiną, oxyLDL czy końcowym produktem zaawansowanej glikacji [4,66,75]. Ponadto p38 MAPK zaangażowana jest w indukowanym TNF-α procesie starzenia się EPC [83].

Rola monocytów/makrofagów w patogenezie miażdżycy – udział kinaz MAP

Osiadłe w błonie wewnętrznej ściany naczynia monocyty podlegają działaniu M-CSF (macrophage colony-stimulating factor), pod wpływem którego dochodzi do serii zmian, prowadzących do ich namnażania i przekształcania się w aktywne makrofagi [33,49]. Pod wpływem M-CSF na powierzchni makrofagów pojawiają się receptory zmiatające, których zadaniem jest usuwanie obcych antygenów i ciałek apoptotycznych. Za pomocą tych receptorów makrofagi pochłaniają również oxyLDL w procesie endocytozy. Ekspresja tych receptorów nie jest zwrotnie regulowana tak, jak ekspresja receptorów dla LDL, co prowadzi do niekontrolowanej akumulacji lipidów i powstania tak charakterystycznych dla miażdżycy komórek piankowatych. Do receptorów zaangażowanych w formowanie komórek piankowatych zaliczamy: CD36, CD68, LOX-1 (lektin-type oxidized low-density lipoprotein receptor), SR-A i SR-B. Pobrane w czasie endocytozy oxyLDL przenoszone są do lizosomów, gdzie estry cholesterolu są hydrolizowane do wolnego cholesterolu i kwasów tłuszczowych [78]. Wolny cholesterol przenoszony jest do błony komórkowej, skąd może być usunięty w procesie transportu zwrotnego z udziałem HDL. Nadmiar wolnego cholesterolu podlega estryfikacji z udziałem ACAT-1, co prowadzi do masywnego nagromadzenia w cytoplazmie kropelek zawierających estry cholesterolu i triglicerydy. Komórki piankowate obecne w zmianie zaawansowanej mają większy stosunek cholesterol wolny/cholesterol zestryfikowany niż te obecne w pasmach tłuszczowych, co jest przyczyną nasilenia apoptozy tych komórek i tym samym powstania rdzenia nekrotycznego.

Wyłapywanie oxyLDL czy innych patogenów lub wydzielane lokalnie cytokiny prowadzą do aktywacji makrofagów, które wydzielają wiele czynników modulujących przebieg miażdżycy [21,33,35,43,49]. Są źródłem czynników chemotaktycznych, takich jak: MCP-1 i IL-8. Zaktywowane makrofagi wydzielają cytokiny zapalne, takie jak: IL-1, IL-6, IL-12 i TNF-α. IL-1 i TNF-α są głównymi mediatorami zapalenia w miażdżycy, to cytokiny o plejotropowym działaniu. Prowadzą m.in.do szeroko pojętej dysfunkcji śródbłonka, w tym zwiększają przepuszczalność komórek śródbłonka i stymulują ekspresję cząsteczek adhezyjnych na ich powierzchni. Wszystko to przyczynia się do dalszej rekrutacji komórek zapalnych w obręb płytki miażdżycowej. Lokalne zapalenie uruchamia systemową odpowiedź zapalną, głównie dzięki IL-6, która pobudza wątrobę do syntezy białek ostrej fazy, w tym CRP [33,44]. CRP okazało się dobrym prognostykiem wystąpienia w przyszłości incydentów naczyniowo-sercowych. Takie makrofagi wydzielają czynniki wzrostowe, które stymulują migracje i proliferacje mięśni gładkich [49]. Zaktywowane makrofagi wydzielają duże ilości RFT, któ- rych głównym źródłem jest oksydaza NADPH [35]. Nasilenie stresu oksydacyjnego w płytce miażdżycowej prowadzi do zwiększonego powstawania oxyLDL. Zaktywowane makrofagi wydzielają metaloproteinazy, które trawią składowe tkanki łącznej przyczyniając się do destabilizacji płytki miażdżycowej [33,49]. Uważa się, że toczące się w zmianie miażdżycowej zapalenie może spowodować przejście zmiany stabilnej w zmianę predysponowaną do pęknięcia [33,36,43]. W porównaniu do stabilnej zmiany miażdżycowej, płytka podatna na pękanie ma ekstremalnie cienką czapeczkę, duży rdzeń nekrotyczny i dużą liczbą komórek zapalnych. Osłabienie pokrywy łącznotkankowej może być następstwem zmniejszenia liczby składowych tkanki łącznej, a także liczby komórek mięśni gładkich. Za destrukcję włókien kolagenowych odpowiedzialne są metaloproteinazy wytwarzane przez zaktywowane makrofagi. Mediatory zapalenia, takie jak IL-1, TNF-α, a zwłaszcza interakcje CD40L/CD40, nasilają ekspresję metaloproteinaz nie tylko w makrofagach, ale także w komórkach śródbłonka i mięśni gładkich. Przyczyną zmniejszenia liczby komórek mięśni gładkich może być ich apoptoza, stymulowana m.in. przez makrofagi. Płytka podatna na pękanie charakteryzuje się obecnością zwiększonej liczby komórek podlegających apoptozie, szczególnie komórek piankowatych i makrofagów, co prowadzi do formowania bogatego w lipidy rdzenia nekrotycznego. Pęknięcie płytki, które jest najczęstszą przyczyną wystąpienia ostrych powikłań klinicznych miażdżycy, powoduje szybkie formowanie zakrzepu, który zamyka światło naczynia w wyniku ekspozycji na dużą liczbę czynnika tkankowego, który jest wytwarzany przez zaktywowane makrofagi.

Kinazy MAP pośredniczą w wielu omówionych wyżej mechanizmach promiażdżycowego funkcjonowania makrofagów obecnych w płytce miażdżycowej. p38 MAPK zaangażowana jest w promowanie różnicowania monocytów w makrofagi [41].

Udział MAPK w  powstawaniu komórek piankowatych wykazano w wielu badaniach. Inkubacja mysich makrofagów z oxy LDL prowadziła do aktywacji ERK1/2, p38 MAPK i JNK1/2 w ciągu 15 min [51]. Makrofagi pobrane od myszy CD36-/- były oporne na indukowaną oxyLDL aktywację JNK1/2, ale nie aktywację p38 MAPK i ERK. CD36 jest transbłonowym receptorem, który łączy się z Src lub MEKK2 poprzez C-końcowy łańcuch cytoplazmatyczny. Zastosowanie inhibitora Src (AG1879) lub inhibitora JNK (SP600125) hamowało tworzenie komórek piankowatych indukowane oxyLDL, ale nie inhibitor ERK. Ponadto p38 MAPK i MKK6, ale nie ERK jest wymagane do stymulowanej oxyLDL ekspresji CD36 [84]. W celu potwierdzenia roli JNK w powstawaniu miażdżycy wykorzystano myszy transgeniczne apE-/- JNK2-/- i wykazano, że po 14 tygodniach diety wysokotłuszczowej myszy pozbawione JNK były oporne na powstawanie miażdżycy [53]. Ponadto u myszy apE-/-, którym podawano SP600125 stwierdzono dużo wolniejsze powstawanie miażdżycy niż u myszy kontrolnych. Makrofagi pochodzące od myszy JNK2 -/-apoE-/- były dużo słabiej podatne na indukowane oxyLDL tworzenie komórek piankowatych niż makrofagi pochodzące od myszy apE-/-. Na podstawie dodatkowych badań autorzy postulują, że JNK2 fosforyluje cytoplazmatyczny koniec CD36 i tym samym promuje tworzenie komórek piankowatych przez nasilenie internalizacji CD36 i związanych z nim oxyLDL.

Jedną z głównych odpowiedzi komórki zależnej od aktywacji p38 jest wytarzanie i aktywacja mediatorów zapalenia. Aktywacja p38 prowadzi do ekspresji wielu genów, których produkty są zaangażowane w promowanie zapalenia, takich jak TNF-α, IL-1β, IL-6 czy IL-8 [23,58]. Hamowanie p38 MAPK przez zastosowanie swoistych inhibitorów, wśród których najbardziej poznanym jest SB203580, hamuje wytwarzanie cytokin w monocytach/ makrofagach i neutrofilach. Znaczenie p38 MAPK w odpowiedzi zapalnej zostało potwierdzone w badaniach in vivo, gdzie oceniano wpływ SB203580 na tę odpowiedź w wielu zwierzęcych modelach doświadczalnych. Wykazano m.in., że SB203580 zmniejsza stymulowane LPS zwiększone wytwarzanie TNF-α u szczurów i myszy oraz śmiertelność u myszy poddanych działaniu LPS. Rzeczywiście znaczenie p38 MAPK w odpowiedzi zapalnej jest dobrze udokumentowane i dlatego wiele kompanii farmaceutycznych podjęło próby produkcji selektywnych inhibitorów p38 MAPK jako leków w chorobach zapalnych [30]. W badaniach przeprowadzonych u zdrowych ludzi, którym podano LPS wykazano, że BIRB 796 SB, inny selektywny inhibitor p38 MAPK, hamował aktywację p38 MAPK w leukocytach, a także wytwarzanie cytokin, takich jak TNF-α, IL-6 i IL-10 [5]. W opublikowanych ostatnio badaniach przeprowadzonych u ludzi poddanych zabiegowi przezskórnej angioplastyki wykazano, że podanie na 3 dni przed zabiegiem innego inhibitora p38 MAPK (SB 681323) związane było z 37% w 5 dniu i 40% w 28 dniu po zabiegu redukcją hsCRP, w porównaniu do grupy z placebo [59].

Ekspresja cytokin prozapalnych może być regulowana przez p38 MAPK zarówno na poziomie transkrypcji, jak i translacji. Kilka czynników transkrypcyjnych może być fosforylowane przez p38 MAPK lub niżej leżące kinazy, włączając w to NF-κB. Jest to czynnik transkrypcyjny, który łącząc się z promotorami określonych genów stymuluje transkrypcję wielu mediatorów odpowiedzi zapalnej i immunologicznej [69]. Najbardziej poznaną postacią NF-κB jest heterodimer zbudowany z podjednostek p65 i p50. W komórkach spoczynkowych zlokalizowany jest w cytoplazmie w połączeniu z białkami inhibitorowymi IκB. Po zadziałaniu czynnika stymulującego dochodzi do fosforylacji miejsca krytycznego w cząsteczce IκB, co indukuje dysocjację kompleksu IκB/NF-κB, a to pozwala na translokację heterodimeru p65/p50 do jądra, gdzie łączy się z promotorami określonych genów. Ponadto optymalna aktywacja NF-κB wiąże się z fosforylacją domeny transaktywacyjnej w p65. Badania Wurmeulen i wsp. [72] wykazały, że aktywowana przez p38 MAPK kinaza MSK1 fosforyluje p65 w pozycji Ser 276. Ponadto p38 MAPK fosforyluje histon 3, który selektywnie występuje w regionach promotorowych genów odpowiedzialnych za ekspresję cytokin i chemokin, co zwiększa dostępność tych regionów i tym samym nasila rekrutację NF-κB.

Najwcześniej i najbardziej poznanymi mechanizmami regulującymi syntezę cytokin jest wpływ p38 MAPK na obróbkę potranskrypcyjną, w co zaangażowana jest głównie MK2 [57]. Myszy pozbawione genu dla MK2 syntetyzowa- ły dużo mniejsze ilości cytokin (TNF-α, IL-1, IL-6, IL-10 i IFN-γ) w porównaniu do myszy typu dzikiego, natomiast poziomy mRNA były na podobnym poziomie. Mechanizm, za pomocą którego p38 MAPK:MK2 regulują syntezę cytokin może być związany z fosforylacją białek związanych z mRNA. Transkrypty wielu cytokin zawierają na swoim końcu 3’ sekwencję ARE (AU rich elements). Do tej sekwencji przyłączają się białka, które regulują stabilizację mRNA. Takim białkiem może być tristetraprolina (TTP), która wpływa na szybką destabilizację mRNA. Tristetraprolina jest substratem dla MK2. Ufosforylowany TTP ulega dysocjacji z ARE co umożliwia biosyntezę cytokin.

Aktywacja ERK1/2 i JNK również reguluje syntezę cytokin prozapalnych poprzez wpływ na AP-1 [20,23]. Jak wspomniano wcześniej JNK fosforyluje c-Jun, co pozwala na powstanie aktywnego AP-1. Również aktywne ERK1/2 fosforylują c-Jun i c-Fos i tym samym aktywują AP-1, który jest czynnikiem transkrypcyjnym regulującym ekspresję wielu cytokin [81]. Jednym z mechanizmów, za pomocą których cytokiny prozapalne nasilają ekspresję metaloproteinaz jest szlak sygnałowy zależny od kinaz MAP, który prowadzi do fosforylacji składowych AP-1 [17].

Znaczenie limfocytów T w patogenezie miażdżycy – rola kinaz MAP

W przewlekły proces zapalny, który jest kluczowy dla patogenezy miażdżycy zaangażowane są nie tylko mechanizmy odpowiedzi nieswoistej, zależne głównie od monocytów/makrofagów, ale także mechanizmy odpowiedzi swoistej, która jest pod kontrolą limfocytów T [21,44,73]. Warto wspomnieć, że makrofagi, jako komórki prezentujące antygen, mogą prezentować obce antygeny limfocytom T, stając się łącznikiem miedzy nieswoistą a swoista odpowiedzią immunologiczną. Obecne w blaszce miażdżycowej limfocyty T to CD4+ (limfocyty pomocnicze) i CD8+ (limfocyty cytotoksyczne), przy czym dominują CD4+ . W chwili zetknięcia się limfocytów T z komórkami prezentującymi antygen, do których zaliczamy makrofagi i komórki dendrytyczne, dochodzi do uruchomienia mechanizmów swoistej odpowiedzi immunologicznej. Następuje wówczas wiązanie antygenów, pociętych na małe fragmenty, połączonych z MHC klasy II na powierzchni komórek prezentujących antygen, przez receptory TCR, obecne na powierzchni limfocytów CD4+ . Do efektywnej aktywacji limfocytów T potrzebna jest ponadto kostymulacja, czyli jednoczesne połączenie odpowiednich białek na limfocytach i komórkach prezentujących antygen. Głównymi antygenami prezentowanymi limfocytom T w miażdżycy są oxyLDL i białka szoku termicznego. Interakcje między limfocytami T a komórkami prezentującymi antygen mogą prowadzić do powstania różnych podtypów limfocytów. Limfocyty CD4+ mogą się różnicować w Th1 lub Th2. Wśród limfocytów CD4+ , które dominują w blaszce miażdżycowej, najwięcej jest limfocytów Th1, które odpowiedzialne są za odpowiedź komórkową i wydzielają głównie IFN-γ i TNF-α. Sugeruje się, że odpowiedź zależna od Th1 nasila progresje miażdżycy. IL-12 jest najczęściej stwierdzaną cytokiną w płytce miażdżycowej, a badania przeprowadzone u myszy apo E-/-, którym podano IL-12 wykazały, że cytokina ta nasila miażdżycę. Cytokina ta, wytwarzana głównie przez niektóre komórki dendrytyczne, odgrywa główną rolę w różnicowaniu limfocytów T w limfocyty Th1 w miażdżycy. Silne działanie proaterogenne ma również IFN-γ, który jest silnym aktywatorem makrofagów [49]. Ponadto hamuje proliferację i różnicowanie komórek mięśni gładkich, hamuje syntezę kolagenu i stymuluje makrofagi do wydzielania metaloproteinaz czym może się przyczynić do destabilizacji płytki miażdżycowej.

Limfocyty T regulatorowe (Treg) są to komórki CD4+ C- D25+ FOXp3+ , które są odpowiedzialne za utrzymanie tolerancji i kontrolę odpowiedzi immunologicznej [39,49,60]. FOXP3 jest swoistym czynnikiem transkrypcyjnym zaangażowanym w supresorowe funkcje Treg. Powstają albo w grasicy albo w obwodowych narządach limfatycznych. Te powstałe w grasicy są to tzw. naturalne komórki Treg. W obwodowych narządach limfatycznych powstają tzw. indukowane Tre (iTreg) w chwili „kooperacji” z komórkami prezentującymi antygen poprzez konwersję naiwnych lub efektorowych limfocytów T. Te swoiste antygenowo Treg hamują efektorowe komórki T albo poprzez bezpośrednie interakcje komórka-komórka albo przez uwalnianie cytokin, takich jak: IL-10 i TGF-β (transforming growth factor β), cytokin o silnych właściwościach immunosupresyjnych. Ponadto cytokiny te, wydzielane przez inne komórki, indukują różnicowanie limfocytów Treg. Myszy pozbawione IL-10, u których miażdżyca wywołana była dietą cholesterolową charakteryzowały się nasileniem powstawania zmian miażdżycowych oraz zwiększoną infiltracją komórek efektorowych i nasiloną ekspresją IFN-γ [40]. Hamowanie działania TGF-β poprzez zastosowanie przeciwciał neutralizujących nasilało powstawanie miażdżycy u myszy pozbawionych ApoE z towarzyszącym wzrostem monocytów, limfocytów i obniżoną ilością włókien kolagenu [38]. Liczba Treg obecnych w zmianie miażdżycowej jest dużo mniejsza niż w innych tkankach objętych przewlekłym zapaleniem [60], co sugeruje, że lokalne upośledzenie tolerancji w płytce miażdżycowej jest odpowiedzialne za nasilenie zapalenia. Ateroprotekcyjne działanie tych komórek wykazano w doświadczeniu przeprowadzonym u myszy z hipercholesterolemią, którym usunięto Treg przez stymulowanie ich apoptozy. Myszy te charakteryzowały się nasileniem zmian miażdżycowych. Ponadto u pacjentów z ostrymi epizodami wieńcowymi występowała zredukowana liczba Treg i o osłabionej funkcji supresorowej [45].

Kinazy MAP wpływają wielokierunkowo na limfocyty T. Odgrywają istotną rolę w regulacji dojrzewania tymocytów w grasicy oraz w negatywnej i pozytywnej ich selekcji [2,15,54]. Zaangażowane są w aktywację CD4 i CD8, ich adhezję chemotaksję i funkcje efektorowe. Kinaza p38 MAPK zaangażowana jest w różnicowanie się naiwnych CD4+ w komórki efektorowe [10,13]. Z badań przeprowadzonych na myszach genetycznie modyfikowanych, jak i z badań z zastosowanie inhibitorów p38MAPK wynika, ze kinaza ta odgrywa istotną rolę w regulacji syntezy IFN-γ i w procesie różnicowania naiwnych CD4+ w kierunku Th1, natomiast wydaje się mniej istotna dla syntezy IL-4 i różnicowania w kierunku Th2.

Zaobserwowano kilka dróg aktywacji p38MAPK w limfocytach T. Najbardziej poznana jest droga klasyczna poprzez kinazy MAPK i MAPKK. Innymi alternatywnymi drogami, zaobserwowanymi jedynie w limfocytach T, jest droga zależna od połączenia z receptorem TCR. Sygnał pochodzący z receptorów prowadzi do fosforylacji ZYAP70, która bezpośrednio aktywuje p38MAPK. Jak dotychczas korzystne działanie inhibitorów p38 wykazano jedynie w odniesieniu do reumatoidalnego zapalenia stawów. Nie ma badań oceniających wpływ tej kinazy na zależną od limfocytów CD4+ odpowiedź immunologiczną w miażdżycy. Jak piszą Dodeller i wsp. [13] zastosowanie różnych nowych inhibitorów p 38 MAPK związane było z obniżeniem CRP u pacjentów ostrymi objawami choroby niedokrwiennej serca. Ekspresja JNK1 i JNK2 w naiwnych limfocytach CD4 jest minimalna, a ulega podwyższeniu w następstwie połą- czenia antygenu z receptorem TCR i pod wpływem cytokin [54].

Podczas aktywacji limfocytów CD4+ dochodzi do aktywacji JNK1 i JNK2 i są one zaangażowane w różnicowanie w Th1 i Th2. Ekspresja tych kinaz jest dużo wyższa w tych komórkach niż w naiwnych CD4+ . Podczas restymulacji gwałtownie wzrosta aktywności JNK jedynie w limfocytach Th1, co sugeruje, że JNK może mieć istotne znaczenie w indukcji odpowiedzi Th1. Myszy pozbawione JNK1 wykazywały brak zróżnicowania w kierunku Th1 z nasiloną odpowiedzią Th2. U myszy pozbawionych JNK2 różnicowanie w kierunku Th2 i wytwarzanie IL-4 były prawidłowe, natomiast upośledzone było różnicowanie w kierunku Th1.

Udział kinaz MAP, tak jak i mechanizmy prowadzące do powstawania komórek Treg, nie jest do końca wyjaśniony. Z dotychczasowych badań wynika, że w iTreg aktywność ERK1/2 i JNK1 jest zredukowana [1]. Natomiast aktywność p38 MAPK jest nawet wyższa niż w komórkach efektorowych. Ponadto aktywność MAPKAP-K 3, które są substratami dla p 38 MAPK jest również podwyższona. Hamowanie aktywności p38 MAPK podczas restymulacji powodowało utratę regulatorowych funkcji iTreg. Kokulatrura komórek efektorowych z iTreg poddanych działaniu SB203580 przywracała zdolność do wytwarzania IL-2 i IFN-γ przez komórki efektorowe. Z badań przeprowadzonych na myszach JNK1-/-JNK2-/- wynika, że JNK hamuje ekspresję genu dla TGF-β co wskazuje, że kinaza ta w sposób negatywny reguluje funkcje supresorowe Treg [71].

Opublikowane ostatnio badania sugerują, że szlaki sygnalizacyjne zależne od kinaz MAP w sposób negatywny regulują stymulowane TGF-β różnicowanie komórek T [7]. Wykazano, że u myszy pozbawionych kinaz MAP3K i MAP2K występuje zwiększona akumulacja limfocytów Treg w porównaniu do myszy kontrolnych. Ponadto naiwne CD4+ pochodzące od tych myszy okazały się bardziej podatne na stymulowane TGF-β różnicowanie w kierunku Treg, jak również na stymulowane tym czynnikiem hamowanie różnicowania w kierunku Th1. Autorzy sugerują, że jest to wynikiem braku aktywacji kinaz ERK, co skutkuje upośledzeniem fosforylacji SMAD2 i SMAD3. Klasyczna droga aktywacji w następstwie połączenia TGF-β ze swoim receptorem związana jest z fosforylacją SMAD2 i SMAD3, co prowadzi do połączenia z SMAD4. Taki kompleks przechodzi do jądra i pośredniczy w transkrypcji określonych genów w tym FOXP3. SMAD mogą być fosforyzowane w tzw. linker region przez kinazy ERK, wywołując zahamowanie fosforylacji SMAD2/3 i tym samym zahamowanie sygnału zależnego od TGF-β. Tak więc zahamowanie fosforylacji w następstwie braku MEKK2/3 skutkuje nasileniem sygnału zależnego od TGF-β i tym samym zwiększeniem różnicowania w kierunku Treg. W innych badaniach wykazano, że zahamowanie szlaku ERK w naiwnych limfocytach CD4+ poddanych silnej stymulacji TCR w obecności TGF-β prowadzi do zwiększenia ilości limfocytów Treg [18].

Wpływ kinaz MAP na migrację i proliferację komórek mięśni gładkich

Komórki mięśni gładkich odgrywają istotną rolę w patogenezie miażdżycy [62]. Pod wpływem wydzielanych lokalnie czynników wzrostowych, głównie PDGF, czy mediatorów zapalenia, których głównym źródłem są zaktywowane makrofagi, obecne w błonie środkowej komórki mięśni gładkich zmieniają swój fenotyp z kurczliwego na syntetyzujący. Podczas formowania zmiany miażdżycowej tak zmienione komórki mięśni gładkich migrują z błony środkowej do błony wewnętrznej, gdzie proliferują i syntetyzują składowe tkanki łącznej. Dzięki działaniu obecnych w błonie wewnętrznej komórek mię- śni gładkich dochodzi najpierw do powstania włóknistej czapeczki pokrywającej zmianę miażdżycową, a następnie do przebudowy ściany naczynia, prowadzącej do jej zwężenia i w rezultacie do upośledzenia dopływu krwi do tkanek.

Sugeruje się, że za różnicowanie się komórek mię- śni gładkich odpowiedzialny jest szlak PI3-K/AKT [47]. Natomiast omówiony wcześniej szlak sygnalizacyjny Ras→Raf→MEK→ERK jest głównym szlakiem odpowiedzialnym za ich migrację i proliferację. Pod wpływem Ang II trombiny czy ET-1 dochodzi do aktywacji białka Rho, które indukuje migrację komórek mięśni gładkich poprzez aktywację MEK4, która aktywuje JNK. W  do- świadczeniach przeprowadzonych na szczurach wykazano, że balonowe uszkodzenie tętnicy szyjnej prowadzi do gwałtownej aktywacji ERK1/2, p38 MAPK i JNK [24,32]. W innym modelu uszkodzenia tętnicy wykazano, że hamowanie ERK i p38 MAPK zmniejszało hiperplazję błony wewnętrznej [85]. W celu zbadania roli kaskady MAPK w formowaniu neointimy stworzono myszy pozbawione Gbr2, którym uszkodzono tętnice szyjne. W 3 tygodnie po uszkodzeniu oceniono formowanie neointimy i aktywacji dróg sygnałowych [82]. Myszy te były oporne na indukowane uszkodzeniem tworzenie neointimy z towarzyszą- cym drastycznym zmniejszeniem liczby komórek mięśni gładkich. Dodatkowo stwierdzono zmniejszenie aktywacji ERK, JNK i p38 MAPK.

Czy hamowanie aktywności kinaz map może być w przyszłości jedną z metod terapeutycznych w profilaktyce i leczeniu chorób, których podłożem jest miażdżyca

Jak wynika z przedstawionych danych kaskada kinaz MAPK odgrywa istotną rolę w patogenezie miażdżycy. Potwierdzają to również wyniki badań in vivo. Jak wspomniano wcześniej MK2 jest jednym z substratów p 38 MAPK. Wykorzystując zwierzęcy model doświadczalny miażdżycy, tzn. myszy pozbawione receptora dla LDL (LDL-/-) obecność aktywnej postaci MK2 (ufosforylowana MK2) stwierdzano głównie w wycinkach aorty objętych zmianą miażdżycową [25]. Usunięcie genu MK2 (LDL-/-/MK2-/-) związane było z istotnie statystycznym zmniejszeniem akumulacji lipidów i makrofagów w obrębie aorty w 8 i 16 dniu diety aterogennej w porównaniu do myszy mającej ten gen, pomimo wzrostu osoczowych stężeń liproprotein. Usunięcie MK2 związane było również z redukcją indukowanego dietą tworzenia komórek piankowatych i zmniejszeniem ekspresji receptora wymiatającego typu A. Ponadto u myszy LDL-/-/MK2-/- stwierdzono zmniejszoną ekspresję VCAM- 1 i MCP-1 w wycinkach z aorty. W innych badaniach wykonanych na szczurach predysponowanych do nadci- śnienia (SHR-SP) wykazano, że zastosowanie GSK-AHAB (inhibitor kinazy p38 MAPK) prowadzi w sposób istotny statystycznie i zależny od dawki do poprawy przeżywalności, relaksacji naczyń i funkcji nerek [74]. Ponadto zastosowanie tego inhibitora związane było z osłabieniem dyslipidemii, nadciśnienia, przebudowy serca, osoczowej aktywności reniny i obniżeniem stężenia IL-1. Badania Seegera i wsp. [64] wykazały, że zastosowanie SB203580 (inhibitor p38 MAPK) u myszy ApoE-/- istotnie zwiększa liczbę komórek angiogennych z jednoczesnym zmniejszeniem liczby komórek zapalnych. Ponadto podawanie SB203580 przez 4 miesiące związane było z redukcją wielkości zmiany miażdżycowej o 51%.

Co ciekawe, wiele leków stosowanych w leczeniu chorób naczyniowo-sercowych ma modulujący wpływ na aktywność kinaz MAP. W badaniach in vitro przeprowadzonych na EPC wykazano, że atorwastatyna redukuje indukowaną homocysteiną aktywację p38 MAPK z jednoczesnym zahamowaniem apoptozy tych komórek [4]. Czterotygodniowa terapia atorwastatyną u pacjentów z tętniakiem aorty brzusznej prowadziła do istotnej redukcji ekspresji JNK w wycinkach uzyskanych po zabiegu usunięcia fragmentu aorty i wszczepieniu protezy, z jednoczesnym zmniejszeniem liczby komórek dendrytycznych limfocytów T i makrofagów [26]. Rosuwastatyna zastosowana u myszy podatnych na cukrzycę przez 6 tygodni prowadziła do redukcji ekspresji Rac 1, ERK1/2 i p38 MAPK w wycinkach aorty [67]. Również olmesartan, lek stosowany w nadciśnieniu, hamował indukowaną angiotensyną II aktywację ERK1/2 i JNK w komórkach mięśni gładkich, co związane było z osłabieniem ich migracji [31].

Przedstawione wyniki sugerują, że ingerencja w szlaki sygnalizacyjne zależne od kinaz MAP może być atrakcyjnym celem w opracowywaniu nowych strategii terapeutycznych w leczeniu chorób naczyniowo-sercowych. Pamiętać jednak należy, o czym wspomniano wcześniej, że poszczególne kinazy aktywują wiele niżej leżących dróg sygnałowych i czynników transkrypcyjnych, a także, że mogą fosforylować nieswoiste substraty, co wywołuje wiele różnorodnych działań biologicznych, trudnych do przewidzenia. Tak więc planowanie badań mających na celu wykazanie, że hamowanie aktywności kinaz MAP może mieć działanie antymiażdżycowe, wymaga dużej ostrożności.

Przypisy

• 1. Adler H.S., Kubsch S., Graulich E., Ludwig S., Knop J., Steinbrink K.:Activation of MAP kinase p38 is critical for the cell-cycle-controlledsuppressor function of regulatory T cells. Blood, 2007; 109: 4351-4359
  Google Scholar
• 2. Ashwell J.D.: The many paths to p38 mitogen-activated protein kinaseactivation in the immune system. Nat. Rev. Immunol., 2006; 6: 532-540
  Google Scholar
• 3. Bao X.M., Wu C.F., Lu G.P.: Atorvastatin attenuates homocysteine–induced apoptosis in human umbilical vein endothelial cells via inhibitingNADPH oxidase-related oxidative stress-triggered p38MAPKsignaling. Acta Pharmacol. Sin., 2009; 30: 1392-1398
  Google Scholar
• 4. Bao X.M., Wu C.F., Lu G.P.: Atorvastatin inhibits homocysteine-inducedoxidative stress and apoptosis in endothelial progenitor cellsinvolving Nox4 and p38MAPK. Atherosclerosis, 2010; 210: 114-121
  Google Scholar
• 5. Branger J., van den Blink B., Weijer S., Madwed J., Bos C.L., GuptaA., Yong C.L., Polmar S.H., Olszyna D.P., Hack C.E., van DeventerS.J., Peppelenbosch M.P., van der Poll T.: Anti-inflammatory effectsof a p38 mitogen-activated protein kinase inhibitor during humanendotoxemia. J. Immunol., 2002; 168: 4070-4077
  Google Scholar
• 6. Chae Y.J., Kim C.H., Ha T.S., Hescheler J., Ahn H.Y., Sachinidis A.:Epigallocatechin-3-O-gallate inhibits the angiotensin II-inducedadhesion molecule expression in human umbilical vein endothelialcell via inhibition of MAPK pathways. Cell. Physiol. Biochem.,2007; 20: 859-866
  Google Scholar
• 7. Chang X., Liu F., Wang X., Lin A., Zhao H., Su B.: The kinases MEKK2and MEKK3 regulate transforming growth factor-β-mediated helperT cell differentiation. Immunity, 2011; 34: 201-212
  Google Scholar
• 8. Chang Y.L., Chen C.L., Kuo C.L., Chen B.C., You J.S.: Glycyrrhetinicacid inhibits ICAM-1 expression via blocking JNK and NF-κB pathwaysin TNF-α-activated endothelial cells. Acta Pharmacol. Sin.,2010; 31: 546-553
  Google Scholar
• 9. Chiu J.J., Chien S.: Effects of disturbed flow on vascular endothelium:pathophysiological basis and clinical perspectives. Physiol.Rev., 2011; 91: 327-387
  Google Scholar
• 10. Cook R., Wu C.C., Kang Y.J., Han J.: The role of the p38 pathwayin adaptive immunity. Cell. Mol. Immunol., 2007; 4: 253-259
  Google Scholar
• 11. Costanzo A., Moretti F., Burgio V.L., Bravi C., Guido F., LevreroM., Puri P.L.: Endothelial activation by angiotensin II through NFκBand p38 pathways: involvement of NFκB-inducible kinase (NIK), freeoxygen radicals, and selective inhibition by aspirin. J. Cell. Physiol.,2003; 195: 402-410
  Google Scholar
• 12. Cuschieri J., Maier R.V.: Mitogen-activated protein kinase(MAPK). Crit. Care Med., 2005; 33 (Suppl. 12): S417-S419
  Google Scholar
• 13. Dodeller F., Schulze-Koops H.: The p38 mitogen-activated proteinkinase signaling cascade in CD4 T cells. Arthritis Res. Ther.,2006; 8: 205
  Google Scholar
• 14. Domoto K., Taniguchi T., Takaishi H., Takahashi T., Fujioka Y.,Takahashi A., Ishikawa Y., Yokoyama M.: Chylomicron remnantsinduce monocyte chemoattractant protein-1 expression via p38MAPK activation in vascular smooth muscle cells. Atherosclerosis,2003; 171: 193-200
  Google Scholar
• 15. Dustin M.L.: T-cell activation through immunological synapsesand kinapses. Immunol. Rev., 2008; 221: 77-89
  Google Scholar
• 16. Endemann D.H., Schiffrin E.L.: Endothelial dysfunction. J. Am.Sos. Nephrol., 2004; 15: 1983-1992
  Google Scholar
• 17. Fanjul-Fernández M., Folgueras A.R., Cabrera S., López-Otín C.:Matrix metalloproteinases: evolution, gene regulation and functionalanalysis in mouse models. Biochim. Biophys. Acta, 2010; 1803:3-19
  Google Scholar
• 18. Gabryšová L., Christensen J.R., Wu X., Kissenpfennig A., MalissenB., O’Garra A.: Integrated T-cell receptor and costimulatory signalsdetermine TGF-β-dependent differentiation and maintenanceof Foxp3+ regulatory T cells. Eur. J. Immunol., 2011; 41: 1242-1248
  Google Scholar
• 19. Galkina E., Ley K.: Vascular adhesion molecules in atherosclerosis.Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 2007; 27: 2292-2301
  Google Scholar
• 20. Guma M., Firestein G.S.: c-Jun N-Terminal kinase in inflammationand rheumatic diseases. Open Rheumatol. J., 2012; 6: 220-231
  Google Scholar
• 21. Hansson G.K., Libby P.: The immune response in atherosclerosis:a double-edged sword. Nat. Rev. Immunol., 2006; 6: 508-519
  Google Scholar
• 22. Hill J.M., Zalos G., Halcox J.P., Schenke W.H., Waclawiw M.A., QuyyumiA.A., Finkel T.: Circulating endothelial progenitor cells, vascularfunction, and cardiovascular risk. N. Engl. J. Med., 2003; 348: 593-600
  Google Scholar
• 23. Hommes D.W., Peppelenbosch M.P., van Deventer S.J.: Mitogenactivated protein (MAP) kinase signal transduction pathways andnovel anti-inflammatory targets. Gut, 2003; 52: 144-151
  Google Scholar
• 24. Hu Y., Cheng L., Hochleitner B.W., Xu Q.: Activation of mitogen–activated protein kinases (ERK/JNK) and AP-1 transcription factorin rat carotid arteries after balloon injury. Arterioscler. Thromb.Vasc. Biol., 1997; 17: 2808-2816
  Google Scholar
• 25. Jagavelu K., Tietge U.J., Gaestel M., Drexler H., Schieffer B., BavendiekU.: Systemic deficiency of the MAP kinase-activated proteinkinase 2 reduces atherosclerosis in hypercholesterolemic mice. Circ.Res., 2007; 101: 1104-1112
  Google Scholar
• 26. Ju H., Behm D.J., Nerurkar S., Eybye M.E., Haimbach R.E., OlzinskiA.R., Douglas S.A., Willette R.N.: p38 MAPK inhibitors amelioratetarget organ damage in hypertension: Part 1. p38 MAPK-dependentendothelial dysfunction and hypertension. J. Pharmacol. Exp. Ther.,2003; 307: 932-938
  Google Scholar
• 27. Kajimoto K., Miyauchi K., Kasai T., Shimada K., Kojima Y., ShimadaA., Niinami H., Amano A., Daida H.: Short-term 20-mg atorvastatintherapy reduces key inflammatory factors including c-JunN-terminal kinase and dendritic cells and matrix metalloproteinaseexpression in human abdominal aortic aneurysmal wall. Atherosclerosis,2009; 206: 505-511
  Google Scholar
• 28. Kim H.S., Ullevig S.L., Zamora D., Lee C.F., Asmis R.: Redox regulationof MAPK phosphatase 1 controls monocyte migration andmacrophage recruitment. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2012; 109:E2803-E2812
  Google Scholar
• 29. Kondoh K., Nishida E.: Regulation of MAP kinases by MAP kinasephosphatases. Biochim. Biophys. Acta, 2007; 1773: 1227-1237
  Google Scholar
• 30. Kumar S., Boehm J., Lee J.C.: p38 MAP kinases: key signallingmolecules as therapeutic targets for inflammatory diseases. Nat.Rev. Drug Discov., 2003; 2: 717-726
  Google Scholar
• 31. Kyotani Y., Zhao J., Tomita S., Nakayama H., Isosaki M., Uno M.,Yoshizumi M.: Olmesartan inhibits angiotensin II-Induced migrationof vascular smooth muscle cells through Src and mitogen-activatedprotein kinase pathways. J. Pharmacol. Sci., 2010; 113: 161-168
  Google Scholar
• 32. Lai K., Wang H., Lee W.S., Jain M.K., Lee M.E., Haber E.: Mitogen–activated protein kinase phosphatase-1 in rat arterial smooth musclecell proliferation. J. Clin. Invest., 1996; 98: 1560-1567
  Google Scholar
• 33. Libby P.: Inflammation and cardiovascular disease mechanisms.Am. J. Clin. Nutr., 2006; 83: 456-460
  Google Scholar
• 34. Libby P., Aikawa M., Schönbeck U.: Cholesterol and atherosclerosis.Biochim. Biophys. Acta, 2000; 1529: 299-309
  Google Scholar
• 35. Libby P., DiCarli M., Weissleder R.: The vascular biology of atherosclerosisand imaging targets. J. Nucl. Med., 2010; 51 (Suppl. 1):33S-37S
  Google Scholar
• 36. Libby P., Ridker P.M., Hansson G.K.: Progress and challenges intranslating the biology of atherosclerosis. Nature, 2011; 473: 317-325
  Google Scholar
• 37. Lin S.J., Shyue S.K., Hung Y.Y., Chen Y.H., Ku H.H., Chen J.W.,Tam K.B., Chen Y.L.: Superoxide dismutase inhibits the expressionof vascular cell adhesion molecule-1 and intracellular cell adhesionmolecule-1 induced by tumor necrosis factor-α in human endothelialcells through the JNK/p38 pathways. Arterioscler. Thromb. Vasc.Biol., 2005; 25: 334-340
  Google Scholar
• 38. Lutgens E., Gijbels M., Smook M., Heeringa P., Gotwals P., KotelianskyV.E., Daemen M.J.: Transforming growth factor-β mediatesbalance between inflammation and fibrosis during plaque progression.Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 2002; 22: 975-982
  Google Scholar
• 39. Mallat Z., Ait-Oufella H., Tedgui A.: Regulatory T cell responses:potential role in the control of atherosclerosis. Curr. Opin. Lipidol.,2005; 16: 518-524
  Google Scholar
• 40. Mallat Z., Besnard S., Duriez M., Deleuze V., Emmanuel F., BureauM.F., Soubrier F., Esposito B., Duez H., Fievet C., Staels B., DuvergerN., Scherman D., Tedgui A.: Protective role of interleukin-10 inatherosclerosis. Circ. Res., 1999; 85: e17-e24
  Google Scholar
• 41. Matsuyama W., Kamohara H., Galligan C., Faure M., Yoshimura T.:Interaction of discoidin domain receptor 1 isoform b (DDR1b) withcollagen activates p38 mitogen-activated protein kinase and promotesdifferentiation of macrophages. FASEB J., 2003; 17: 1286-1288
  Google Scholar
• 42. McKay M.M., Morrison D.K.: Integrating signals from RTKs toERK/MAPK. Oncogene, 2007; 26: 3113-3121
  Google Scholar
• 43. McLaren J.E., Michael D.R., Ashlin T.G., Ramji D.P.: Cytokines,macrophage lipid methabolism and foam cells: implications forcardiovascular disease therapy. Prog. Lipid Res., 2011; 50: 331-347
  Google Scholar
• 44. Montecucco F., Mach F.: Atherosclerosis is an inflammatory disease.Semin. Immunopathol., 2009; 31: 1-3
  Google Scholar
• 45. Mor A., Luboshits G., Planer D., Keren G., George J.: Altered statusof CD4(+)CD25(+) regulatory T cells in patients with acute coronarysyndromes. Eur. Heart J., 2006; 27: 2530-2537
  Google Scholar
• 46. Mudau M., Genis A., Lochner A., Strijdom H.: Endothelial dysfunction:the early predictor of atherosclerosis. Cardiovasc. J. Afr.,2012; 23: 222-231
  Google Scholar
• 47. Muto A., Fitzgerald T.N., Pimiento J.M., Maloney S.P., Teso D.,Paszkowiak J.J., Westvik T.S., Kudo F.A., Nishibe T., Dardik A.: Smoothmuscle cell signal transduction: implications of vascular biologyfor vascular surgeons. J. Vasc. Surg., 2007; 45 (Suppl. A): A15-A24
  Google Scholar
• 48. Nakagami H., Morishita R., Yamamoto K., Yoshimura S.I., TaniyamaY., Aoki M., Matsubara H., Kim S., Kaneda Y., Ogihara T.: Phosphorylationof p38 mitogen-activated protein kinase downstreamof bax-caspase-3 pathway leads to cell death induced by high D–glucose in human endothelial cells. Diabetes, 2001; 50: 1472-1481
  Google Scholar
• 49. Packard R.R., Lichtman A.H., Libby P.: Innate and adaptive immunityin atherosclerosis. Semin. Immunopathol., 2009; 31: 5-22
  Google Scholar
• 50. Qamirani E., Ren Y., Kuo L., Hein T.W.: C-reactive protein inhibitsendothelium-dependent NO-mediated dilation in coronary arteriolesby activating p38 kinase and NAD(P)H oxidase. Arterioscler.Thromb. Vasc. Biol., 2005; 25: 995-1001
  Google Scholar
• 51. Rahaman S.O., Lennon D.J., Febbraio M., Podrez E.A., Hazen S.L.,Silverstein R.L.: A CD36-dependent signaling cascade is necessaryfor macrophage foam cell formation. Cell Metab., 2006; 4: 211-221
  Google Scholar
• 52. Raman M., Chen W., Cobb M.H.: Differential regulation and propertiesof MAPKs. Oncogene, 2007; 26: 3100-3112
  Google Scholar
• 53. Ricci R., Sumara G., Sumara I., Rozenberg I., Kurrer M., AkhmedovA., Hersberger M., Eriksson U., Eberli F.R., Becher B., BorénJ., Chen M., Cybulsky M.I., Moore K.J., Freeman M.W., Wagner E.F.,Matter C.M., Lüscher T.F.: Requirement of JNK2 for scavenger receptorA-mediated foam cell formation in atherogenesis. Science,2004; 306: 1558-1561
  Google Scholar
• 54. Rincón M., Davis R.J.: Regulation of the immune responseby stress-activated protein kinases. Immunol. Rev., 2009; 228: 212-224
  Google Scholar
• 55. Ross R.: Atherosclerosis – an inflammatory disease. N. Engl. J.Med., 1999; 340: 115-126
  Google Scholar
• 56. Rubinfeld H., Seger R.: The ERK cascade: a prototype of MAPKsignaling. Mol. Biotechnol., 2005; 31: 151-174
  Google Scholar
• 57. Saklatvala J.: The p38 MAP kinase pathway as a therapeutic targetin inflammatory disease. Curr. Opin. Pharmacol., 2004; 4: 372-377
  Google Scholar
• 58. Saklatvala J., Dean J., Clark A.: Control of the expression of inflammatoryresponse genes. Biochem. Soc. Symp., 2003; 70: 95-106
  Google Scholar
• 59. Sarov-Blat L., Morgan J.M., Fernandez P., James R., Fang Z., HurleM.R., Baidoo C., Willette R.N., Lepore J.J., Jensen S.E., SprecherD.L.: Inhibition of p38 mitogen-activated protein kinase reducesinflammation after coronary vascular injury in humans. Arterioscler.Thromb. Vasc. Biol., 2010; 30: 2256-2263
  Google Scholar
• 60. Sasaki N., Yamashita T., Takeda M., Hirata K.: Regulatory T cellsin atherogenesis. J. Atheroscler. Thromb., 2012; 19: 503-515
  Google Scholar
• 61. Schlessinger J.: Cell signaling by receptor tyrosine kinases. Cell,2000; 103: 211-225
  Google Scholar
• 62. Schwartz S.M., Virmani R., Rosenfeld M.E.: The good smooth musclecells in atherosclerosis. Curr. Atheroscler. Rep., 2000; 2: 422-429
  Google Scholar
• 63. Seeger F.H., Haendeler J., Walter D.H., Rochwalsky U., Reinhold J.,Urbich C., Rössig L., Corbaz A., Chvatchko Y., Zeiher A.M., DimmelerS.: p38 mitogen-activated protein kinase downregulates endothelialprogenitor cells. Circulation, 2005; 111: 1184-1191
  Google Scholar
• 64. Seeger F.H., Sedding D., Langheinrich A.C., Haendeler J., ZeiherA.M., Dimmeler S.: Inhibition of the p38 MAP kinase in vivo improvesnumber and functional activity of vasculogenic cells and reducesatherosclerotic disease progression. Basic Res. Cardiol., 2010;105: 389-397
  Google Scholar
• 65. Son Y., Cheong Y.K., Kim N.H., Chung H.T., Kang D.G., Pae H.O.:Mitogen-activated protein kinases and reactive oxygen species: howcan ROS activate MAPK pathways? J. Signal Transduct., 2011; 2011:792639
  Google Scholar
• 66. Sun C., Liang C., Ren Y., Zhen Y., He Z., Wang H., Tan H., Pan X.,Wu Z.: Advanced glycation end products depress function of endothelialprogenitor cells via p38 and ERK 1/2 mitogen-activated proteinkinase pathways. Basic Res. Cardiol., 2009; 104: 42-49
  Google Scholar
• 67. Tian X.Y., Wong W.T., Xu A., Chen Z.Y., Lu Y., Liu L.M., Lee V.W.,Lau C.W., Yao X., Huang Y.: Rosuvastatin improves endothelial functionin db/db mice: role of angiotensin II type 1 receptors and oxidativestress. Br. J. Pharmacol., 2011; 164: 598-606
  Google Scholar
• 68. Ueno H., Pradhan S., Schlessel D., Hirasawa H., Sumpio B.E.: Nicotineenhances human vascular endothelial cell expression of ICAM-1 and VCAM-1 via protein kinase C, p38 mitogen-activated proteinkinase, NF-kappaB, and AP-1. Cardiovasc. Toxicol., 2006; 6: 39-50
  Google Scholar
• 69. Van der Heiden K., Cuhlmann S., Luong le A., Zakkar M., EvansP.C.: Role of nuclear factor κB in cardiovascular health and disease.Clin. Sci., 2010; 118: 593-605
  Google Scholar
• 70. Varma S., Breslin J.W., Lal B.K., Pappas P.J., Hobson R.W.2nd, DuránW.N.: p42/44MAPK regulates baseline permeability and cGMP–induced hyperpermeability in endothelial cells. Microvasc. Res.,2002; 63: 172-178
  Google Scholar
• 71. Ventura J.J., Kennedy N.J., Flavell R.A., Davis R.J.: JNK regulatesautocrine expression of TGF-β1. Mol. Cell, 2004; 15: 269-278
  Google Scholar
• 72. Vermeulen L., De Wilde G., Van Damme P., Vanden Berghe W.,Haegeman G.: Transcriptional activation of the NF-κB p65 subunitby mitogen- and stress-activated protein kinase-1 (MSK1). EMBOJ., 2003; 22: 1313-1324
  Google Scholar
• 73. Wigren M., Nilsson J., Kolbus D.: Lymphocytes in atherosclerosis.Clin. Chim. Acta, 2012; 413: 19-20
  Google Scholar
• 74. Willette R.N., Eybye M.E., Olzinski A.R., Behm D.J., Aiyar N., ManiscalcoK., Bentley R.G., Coatney R.W., Zhao S., Westfall T.D., DoeC.P.: Differential effects of p38 mitogen-activated protein kinase andcyclooxygenase 2 inhibitors in a model of cardiovascular disease. J.Pharmacol. Exp. Ther., 2009; 330: 964-970
  Google Scholar
• 75. Wu Y., Wang Q., Cheng L., Wang J., Lu G.: Effect of oxidized low–density lipoprotein on survival and function of endothelial progenitorcell mediated by p38 signal pathway. J. Cardiovasc. Pharmacol.,2009; 53: 151-156
  Google Scholar
• 76. Xu H., Duan J., Wang W., Dai S., Wu Y., Sun R., Ren J.: Reactiveoxygen species mediate oxidized low-density lipoprotein-inducedendothelin-1 gene expression via extracellular signal-regulated kinasein vascular endothelial cells. J. Hypertens., 2008; 26: 956-963
  Google Scholar
• 77. Yang W.S., Lee J.M., Han N.J., Kim Y.J., Chang J.W., Park S.K.:Mycophenolic acid attenuates tumor necrosis factor-α-induced endothelin-1production in human aortic endothelial cells. Atherosclerosis,2010; 211: 48-54
  Google Scholar
• 78. Yu X.H., Fu Y.C., Zhang D.W., Yin K., Tang C.K.: Foam cells inatherosclerosis. Clin. Chim. Acta, 2013; 424: 245-252
  Google Scholar
• 79. Zapolska-Downar D., Sygitowicz G., Jarosz M.: Znaczenie apoptozyw patogenezie miażdżycy. Kardiologia Polska, 2008; 66 (Suppl.3): 347-357
  Google Scholar
• 80. Zarubin T., Han J.: Activation and signaling of the p38 MAP kinasepathway. Cell Res., 2005; 15: 11-18
  Google Scholar
• 81. Zenz R., Eferl R., Scheinecker C., Redlich K., Smolen J., SchonthalerH.B., Kenner L., Tschachler E., Wagner E.F.: Activator protein 1 (Fos/Jun) functions in inflammatory bone and skin disease. ArthritisRes. Ther., 2008; 10: 201
  Google Scholar
• 82. Zhang S., Ren J., Khan M.F., Cheng A.M., Abendschein D., MuslinA.J.: Grb2 is required for the development of neointima in responseto vascular injury. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 2003;23: 1788-1793
  Google Scholar
• 83. Zhang Y., Herbert B.S., Rajashekhar G., Ingram D.A., Yoder M.C.,Clauss M., Rehman J.: Premature senescence of highly proliferativeendothelial progenitor cells is induced by tumor necrosis factor-αvia the p38 mitogen-activated protein kinase pathway. FASEB J.,2009; 23: 1358-1365
  Google Scholar
• 84. Zhao M., Liu Y., Wang X., New L., Han J., Brunk U.T.: Activation ofthe p38 MAP kinase pathway is required for foam cell formation frommacrophages exposed to oxidized LDL. APMIS, 2002; 110: 458-468
  Google Scholar
• 85. Zou Y., Qi Y., Roztocil E., Nicholl S.M., Davies M.G.: Patterns ofkinase activation induced by injury in the murine femoral artery. J.Surg. Res., 2007; 142: 332-340
  Google Scholar

Pełna treść artykułu